行業(yè)動(dòng)態(tài)
一篇研究展示了一種名為pseU-TRACE的新型技術(shù),通過(guò)亞硫酸氫鹽輔助和連接的qPCR擴(kuò)增技術(shù),實(shí)現(xiàn)了假尿苷(Ψ)在堿基分辨率上的特異性檢測(cè),為深入分析其分布和功能提供了全新手段。
迄今為止,科學(xué)家已經(jīng)在RNA中鑒定出超過(guò)150種化學(xué)修飾,其中假尿苷是最常見(jiàn)的修飾之一。假尿苷在多種生物過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色,然而,精確的堿基分辨率檢測(cè)方法對(duì)于深入研究其分布和功能至關(guān)重要。
圖源:Nucleic Acids Research(2024),doi.org/10.1093/nar/gkae344
研究團(tuán)隊(duì)引入了一種名為pseU-TRACE的新方法,該方法基于以下原理:含有假尿苷的RNA在亞硫酸氫鹽(BS)處理后的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中會(huì)發(fā)生堿基刪除,這使得兩個(gè)與Ψ位點(diǎn)兩側(cè)cDNA序列互補(bǔ)的探針能夠高效連接,并在后續(xù)的實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)中成功擴(kuò)增,從而實(shí)現(xiàn)選擇性和準(zhǔn)確的假尿苷檢測(cè)。
pseU-TRACE方法能夠準(zhǔn)確且敏感地檢測(cè)28S、18S、5.8S以及mRNA中的多個(gè)已知假尿苷位點(diǎn)。該方法還可以用于測(cè)量RNA中假尿苷的分?jǐn)?shù),并探索不同假尿苷合成酶(PUSs)的假尿苷代謝,提供了對(duì)假尿苷功能的寶貴見(jiàn)解。
pseU-TRACE代表了一種可靠、高效且靈敏的假尿苷檢測(cè)方法,為RNA修飾研究提供了新的工具。這一技術(shù)的突破,不僅為揭示假尿苷在生物過(guò)程中的作用提供了新途徑,還為進(jìn)一步研究RNA修飾在基因表達(dá)調(diào)控和細(xì)胞功能中的重要性開(kāi)辟了新的方向。未來(lái)的研究應(yīng)繼續(xù)優(yōu)化pseU-TRACE方法,并應(yīng)用于更廣泛的RNA修飾研究領(lǐng)域。這將有助于揭示假尿苷及其他RNA修飾在各種生物過(guò)程中的具體機(jī)制和功能,為生物醫(yī)學(xué)研究和應(yīng)用提供新的可能性。
此次研究通過(guò)開(kāi)發(fā)pseU-TRACE技術(shù),實(shí)現(xiàn)了對(duì)假尿苷的高效、特異性檢測(cè)。這一突破為RNA修飾研究提供了新的工具和視角,預(yù)示著RNA修飾功能解析的新時(shí)代的到來(lái)??茖W(xué)家們期待,隨著更多相關(guān)研究的展開(kāi),假尿苷在基因表達(dá)和細(xì)胞功能中的重要角色將被進(jìn)一步揭示。
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