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研究人員設(shè)計(jì)了一種新的方法來(lái)提高測(cè)序數(shù)據(jù)中定量RNA分子的準(zhǔn)確性。這項(xiàng)研究的主要重點(diǎn)是解決在測(cè)序?qū)嶒?yàn)中用于定量RNA分子的唯一分子標(biāo)識(shí)符(UMIs)的PCR擴(kuò)增錯(cuò)誤問(wèn)題。雖然UMIs在減少PCR偏差方面有效，但與PCR擴(kuò)增相關(guān)的測(cè)序錯(cuò)誤仍然對(duì)準(zhǔn)確定量RNA分子構(gòu)成挑戰(zhàn)。該研究提出了一種利用同源三聚體核苷酸塊合成UMIs的新方法，該方法有效地糾正了測(cè)序錯(cuò)誤，并使測(cè)序分子的計(jì)數(shù)更加準(zhǔn)確。

圖源：Nature methods(2024), DOI: 10.1038/s41592-024-02168-y

UMIs是一種隨機(jī)的寡核苷酸序列，在測(cè)序?qū)嶒?yàn)中被廣泛用于減輕PCR擴(kuò)增偏差。然而，PCR相關(guān)的測(cè)序錯(cuò)誤對(duì)絕對(duì)RNA分子計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性的影響被低估了。研究表明，PCR錯(cuò)誤導(dǎo)致大量和單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確，對(duì)獲得精確的RNA分子計(jì)數(shù)提出了重大挑戰(zhàn)。研究人員提出了一種新的糾錯(cuò)解決方案，即利用同源三聚體核苷酸塊合成UMIs。這種創(chuàng)新的方法有效地糾正了測(cè)序錯(cuò)誤，使測(cè)序分子的絕對(duì)計(jì)數(shù)更準(zhǔn)確。通過(guò)使用同源三聚體核苷酸塊合成的UMIs，研究人員提高了RNA分子定量的準(zhǔn)確性，克服了PCR誤差帶來(lái)的限制。

這項(xiàng)突破性的技術(shù)為我們?cè)谡w和單細(xì)胞水平上對(duì)基因表達(dá)和細(xì)胞過(guò)程的理解提供了很好的思路和一種更精確的RNA分子定量方法，此項(xiàng)創(chuàng)新為包括分子生物學(xué)、基因組學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究在內(nèi)的各個(gè)領(lǐng)域的研究開(kāi)辟了新的途徑。

隨著研究人員不斷完善和應(yīng)用這種新方法，我們可以預(yù)測(cè)在分析基因表達(dá)模式、揭示疾病機(jī)制和開(kāi)發(fā)靶向治療方面的能力將進(jìn)一步提高。

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